二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶kaiyun登录平台

Rubisco可催化核酮糖-1,5-二磷酸（RuBP）和CO2結合生成3-磷酸甘油酸，3-磷酸甘油酸可進一步在3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的催化作用下生成甘油醛-3-磷酸，反應過程中伴隨著NADH氧化生成NAD+，NADH在340 nm處有特征吸收峰，通過測定340 nm處吸光度的下降速率即可表征Rubisco活性。

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶kaiyun登录平台測定過程中所需要的儀(yi) 器和試劑：紫外分光光度計、1 mL 石英比色皿、恒溫水浴/培養(yang) 箱、台式 離心機、可調式移液器、研缽/勻漿器和蒸餾水。

樣品處理 ①細菌或細胞：離心收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，按照細菌或細胞數量（104 個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL） 為(wei) （500-1000）：1 的比例（建議 500 萬(wan) 細菌或細胞加入 1 mL 提取液）處理樣品，冰浴超聲破碎細菌 或細胞（功率 20%或 200 W，超聲 3 s，間隔 10 s，重複 30 次），4℃ 10000 g 離心 10 min，取上清置 於(yu) 冰上待測。 ②組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 1：（5-10）的比例（建議稱取約 0.1 g 組織， 加入 1 mL 提取液）處理樣品，冰浴勻漿，4℃ 10000 g 離心 10 min，取上清置於(yu) 冰上待測。

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶kaiyun登录平台吸光值測定：①立即混勻放入 25℃水浴或培養(yang) 箱中並開始計時，測定 20 s（總時間）時 340 nm 處吸光值，記為(wei) A1 測定和 A1 空白；②準確反應 300 s，測定 320 s（總時間）時 340 nm 處吸光值， 記為(wei) A2 測定和 A2 空白；③計算 ΔA 測定=A1 測定-A2 測定，ΔA 空白=A1 空白-A2 空白，ΔA=ΔA 測 定-ΔA 空白。注：空白組隻需測定 1-2 次；準確在 20 s 和 320 s 處完成讀數，以保證實驗結果的準確。