活性試劑盒裝載探針的相關使用說明

　　活性試劑盒是一種利用熒光探針進行活性氧檢測的試劑盒。本身沒有熒光，可以自由穿過細胞膜，進入細胞內後，可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜，從而使探針很容易被裝載到細胞內。細胞內的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細胞內活性氧的水平。

 

　　活性試劑盒裝載探針對於刺激時間較短，通常為2小時以內的細胞，先裝載探針，後用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞。對於細胞刺激時間較長，通常為6小時以上的細胞，先用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞，後裝載探針。

 

　　原位裝載探針：本方法僅適用於貼壁培養細胞。按照1∶1000用無血清培養液稀釋DCFH-DA，使終濃度為10μmol/L。去除細胞培養液，加入適當體積稀釋好的DCFH-DA。加入的體積以能充分蓋住細胞為宜，通常對於六孔板的一個孔加入稀釋好的DCFH-DA不少於1mL。37℃細胞培養箱內孵育20分鍾。用無血清細胞培養液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內的DCFH-DA。通常活性氧陽性對照在刺激細胞20～30分鍾後可以顯著提高活性氧水平。

 

　　收集細胞後裝載探針：按照1∶1000用無血清培養液稀釋DCFH-DA，使終濃度為10μmol/L。細胞收集後懸浮於稀釋好的DCFH-DA中，細胞濃度為一百萬至二千萬/mL，37℃細胞培養箱內孵育20分鍾。每隔3～5分鍾顛倒混勻一下，使探針和細胞充分接觸。用無血清細胞培養液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內的DCFH-DA。直接用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞，或把細胞等分成若幹份後刺激細胞。通常活性氧陽性對照在刺激細胞20～30分鍾後可以顯著提高活性氧水平。